文章目录

1 材料与方法

1.1 材料

1.2 主要试剂及仪器

1.3 方法

    1.3.1 中药制备

    1.3.2 SEE与中药共培养浓度的测定

    1.3.3 SEE菌株形态检查

    1.3.4 菌株耐药基因及毒力基因的PCR检测

    1.3.5 小鼠体内抑菌试验

    1.3.6 小鼠体内SEE菌株的分离及fneB毒力基因检测

2 结 果

2.1 药菌浓度配比结果

2.2 SEE形态学观察结果

2.3 耐药基因及毒力基因检测结果

    2.3.1 耐药基因qnrA和blaTEM检测结果

    2.3.2 毒力基因fneB和ply检测结果

2.4 小鼠致病性试验结果

2.5 小鼠肝脏病理变化

2.6 小鼠fneB毒力基因检测结果

3 讨 论

4 结 论

文章摘要:【目的】研究金银花、连翘及金银花-连翘药对（金银花-连翘1∶1）对北疆地区携带fneB毒力基因的马链球菌马亚种（Streptococcus equi subsp.equi,SEE）耐药基因和毒力基因的影响。【方法】首先对1 g/mL的金银花、连翘及金银花-连翘药对（金银花-连翘1∶1）水提物进行中药配比浓度梯度试验,然后与携带fneB毒力基因的L1菌株、lytA+fneB+ply毒力基因的D1菌株和qnrA+bla_TEM+fneB基因的Y1菌株3种SEE菌株共培养,检测中药对SEE菌株耐药基因bla_TEM、qnrA及毒力基因ply、fneB的影响;将192只SPF级昆明小鼠均分为16组:空白对照组（生理盐水）、金银花组、连翘组、金银花-连翘1∶1组、阴性对照组（Y1、L1和D1菌株组）及3种菌株分别与金银花、连翘和金银花-连翘1∶1共培养组,各组药物或菌液经腹腔注射0.5 mL进行小鼠体内抑菌试验,检测药物对小鼠的致病性和fneB毒力基因的影响。【结果】中药最适配比浓度为中药水提物∶THB培养基∶待测菌液(D_{600 nm}值均为0.6)为1 000μL∶500μL∶20μL;与中药水提取物共培养的3株SEE菌株均未检出耐药基因和毒力基因,且菌株形态结构均未发生改变。小鼠致病性试验结果显示,阴性对照组的小鼠成活率分别为16.7%、8.3%和0;而L1+连翘、L1+金银花共培养组小鼠存活率分别为83.3%、75.0%,金银花-连翘1∶1药对与3株SEE菌株共培养组小鼠成活率分别为41.7%、16.7%、50.0%;小鼠病理解剖结果显示,除接种SEE菌株的小鼠肝脏肿大淤血、边缘钝圆外,其余各组肝脏均正常。小鼠体内fneB毒力基因检测结果显示,Y1+金银花、Y1+连翘、Y1+金银花-连翘1∶1、L1+金银花、L1+金银花-连翘1∶1、D1+金银花、D1+连翘、D1+金银花-连翘组均携带fneB毒力基因,L1+连翘组未检出fneB毒力基因,表明小鼠体内SEE菌株有重新获得fneB毒力基因的能力,出现菌种反毒复壮,其机制有待进一步研究。【结论】金银花、连翘及金银花-连翘药对能够减弱SEE菌株的毒力基因和耐药基因,从而对马腺疫疾病的防治具有指导意义,为减抗、替抗提供理论支撑。

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