《中国中药杂志》
大豆异黄酮是以3-苯并吡喃酮为母核的化合物群,其中主要成分有6种,分别是大豆苷(daidzin)、黄豆黄苷(glycitin)、染料木苷(genistin)、大豆苷元(daidzein)、黄豆黄素(glycitein)和染料木素(genistein)[1-2]。大豆制品因加工方法不同,其中异黄酮含量存在差异,发酵大豆食品以不含糖苷异黄酮为主,配糖体异黄酮含量较低,而非发酵食品和大豆粉的异黄酮含量高于一般传统大豆食品的2~3倍,以大豆苷和染料木苷为主[3]。大豆异黄酮的化学结构与人体内分泌的雌激素雌二醇(E2)很相似,能在一定条件下表现出类似雌激素的生物活性,对内分泌与代谢系统疾病具有良好的调节改善作用[4],可预防心血管疾病、延缓衰老、降低乳腺癌和前列腺癌等疾病的发病率、缓解更年期雌激素分泌减少而引起的停经期综合征和骨质疏松症、抗氧化和降低胆固醇等[3,5-8]。因大豆异黄酮具有重要的生物活性,有必要对其进行深入研究。本文对近年来中药和食品中大豆异黄酮的分析方法进行综述。
1 大豆异黄酮的分析方法
1.1薄层扫描法 徐艳春等[9]利用薄层扫描法,建立了红曲及其制剂血脂康中大豆苷元的含量测定方法。样品用体积分数为75%的乙醇提取后过氧化铝柱,用体积分数为75%的乙醇洗脱,将洗脱液蒸干,用氯仿-甲醇(2∶1)定容。以环己烷-乙酸乙酯-甲醇(5∶4∶0.7)为展开剂,硅胶GF254预制板,UV 254 nm处观察荧光淬灭斑点,结果大豆苷元与其他成分分离良好,可以定量。扫描条件为:测定波长λS=295 nm,参比波长λR=350 nm,双波长反射法锯齿扫描,线性化系数SX=7。结果显示,大豆苷元点样量在0.1~0.5 μg范围内线性关系良好,平均回收率为98.7%,相对标准偏差(RSD)为5.00%。
周晓霞[10]建立了测定中药葛根、粉葛中大豆苷元含量的薄层扫描法。样品用甲醇提取,以硅胶G板为薄层吸附剂,展开剂为三氯甲烷-无水乙醇(10∶1),在激发波长λex=260 nm处扫描大豆苷元色谱峰的荧光强度。结果显示,大豆苷元的点样量在0.048 8~0.244 0 μg范围内与其薄层荧光扫描色谱峰面积呈良好的线性关系,测得葛根、粉葛样品中大豆苷元的含量分别为0.323%,0.059 8%。
1.2紫外分光光度法 张玉梅等[11]通过紫外分光光度法,建立了一种检测食物中大豆异黄酮含量的快速分析方法。以金雀异黄素(即染料木素)为对照品,在其紫外最大吸收峰259 nm波长处测定大孔吸附树脂法配合溶剂法提取制得的大豆异黄酮试样的含量,结果试样中总异黄酮的含量以金雀异黄素计算为38.7%,平均回收率为99.86%,RSD值为2.6%,适用于保健食品中大豆异黄酮的含量测定。
付钰洁等[12]利用紫外分光光度法,建立了检测大豆提取物中大豆异黄酮含量的快速分析方法。以葛根素为对照品,在其紫外最大吸收峰250 nm波长处测定,脱脂大豆粉样品采用超声波循环回流提取25 min,提取液经高速离心,取上清液用蒸馏水稀释后进行分析。结果显示,葛根素质量浓度在2.0~60.0 mg·L-1范围内呈良好线性关系,样品的平均回收率为99.87%,RSD值为1.04%。
1.3高效液相色谱(HPLC)法 Mitani K等[13]采用管内固相微萃取结合HPLC技术(in-tube SPME-HPLC),建立了自动在线检测大豆苷元、染料木素、大豆苷和染料木苷的方法。管内固相微萃取(SPME)是一种从水溶性样品中提取有机化合物的新技术,通过样品溶液的重复抽吸或喷射循环,将待分析成分直接从样品中置于开放的管状毛细管中。采用Zorbax Eclipse XDB-C8柱,以甲醇-水为流动相,梯度洗脱,检测波长为255 nm,4种待测成分可在8 min内完全分离。为优化待测成分的提取工艺,对SPME参数进行优化。待测成分质量浓度在5~200 ng·mL-1范围内线性关系良好,相关系数(r)大于0.999 9,检测限为0.4~0.5 ng·mL-1,平均回收率高于97%。该方法可成功应用于大豆食品的分析。
王剑波等[14]建立了测定槐角提取物中染料木素含量的HPLC法。样品采用甲醇超声提取,采用Luna C18柱,流动相为甲醇-水(60∶40),检测波长为260 nm,结果显示,染料木素质量浓度在40.2~201.0 μg·mL-1范围内与峰面积呈良好的线性关系,平均回收率为98.93%,RSD值为0.81%。
苏菊等[15]应用HPLC法建立了测定保健食品中大豆苷、染料木苷、大豆苷元和染料木素含量的方法。采用Waters Spherisorb ODS-2柱,以甲醇-冰醋酸水溶液(40∶60)为流动相,检测波长为254 nm,结果显示,4种成分均在1~50 μg·mL-1范围内线性关系良好,平均回收率为85%~110%。
郑玲等[16]建立了测定峨嵋葛根中染料木素的HPLC法。采用Kromasil C18柱,流动相为甲醇-20 mL·L-1乙酸(47∶53),检测波长为254 nm,结果显示,染料木素质量浓度在4.07~40.72 μg·mL-1范围内线性关系良好,平均回收率为102.3%,RSD值为0.76%。
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